作者:史红熊剑锋祖英斌丁文格唐万勇
年代,美国首次报道了滑液囊支原体(MycoplasmaSynoviae,MS)所致的感染。年之前,我国鲜有以滑膜炎为主要病理变化的滑液囊支原体的流行与报道,即使少数地区个别肉鸡、蛋鸡发生该病,也多以上呼吸道感染为主,且常常与鸡*支原体、大肠杆菌等混合感染而难以确诊。但是在年之后,以滑膜炎为主要特征的滑液囊支原体在我国呈爆性普遍流行。成为蛋鸡场和肉鸡场的重要疾病之一。
和其它支原体一样,MS一旦在鸡群中感染就很难根除,其长期蔓延导致鸡群生长不良,死亡淘汰率增高,鸡肉品质和产蛋率大幅下降,加剧其他病原体致病力增加死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。
MS在临床上有几种表现形式。最常见的类型是亚临床型,症状轻微,一般不易观察到,但如果并发新城疫或传染性支气管炎时则可引起气囊病变。有时滑液囊支原体会引起全身性感染并导致传染性滑膜炎,这是鸡和火鸡的一种急性或慢性传染性疾病,主要引起渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎或粘液囊炎,临床表现为关节肿大、跛行或瘫痪,跗关节肿胀等。在产蛋鸡,也可发生嗜输卵管的病状,引起产蛋畸形。
本文描述了滑液囊支原体的生物学特性,并对其相关疾病的发生和控制进行综述,供同仁参考。
1、滑液囊支原体
滑液囊支原体发现得很晚,这一名称是由Olson等人(年)首先提出,后来经过证明它不同于其他支原体,而被单独列为一个种进行研究。滑液囊支原体是一类无细胞壁的原核细胞型微生物,形态多样,直径约0.2-0.4μm,能通过细菌滤器,以芽生方式或二分裂法繁殖。它能在体外人工无细胞培养基中生长但营养要求较高,其生长过程较鸡*支原体(MycoplasmaGallisepticum,MG)缓慢,固体培养基放置在含5%的CO2的湿润培养箱内培养一周左右,低倍显微镜下可见圆形、隆起的典型的“油煎蛋”样菌落(图1)。
图1低倍显微镜下滑液囊支原体菌落形态,呈“油煎蛋”样外观
2、流行病学
所有的支原体的共同特点就是虽然抵抗力弱,但是广泛存在;虽然难以培养,却很易污染和感染;虽然感染很普遍,临床上却多为慢性经过,在不知不觉中引起广泛的损失。
2.1抵抗力
滑液囊支原体对冷、热、干燥和一般消*剂都很敏感,在宿主以外的环境中生存能力很差,在湿冷环境中只能存活几天,但在干燥和炎热的环境中只能存活几个小时。
2.2易感动物
本病原体自然状态下仅感染鸡、火鸡和珍珠鸡,人工感染可致野鸡、鹅、鸭和虎皮鹦鹉发病。
2.3传染源
病鸡和隐性感染鸡是主要的传染源,其分泌物、排泄物中含有大量病原。
2.4传播途径
滑液囊支原体既可垂直传播,也能水平传播。种鸡场的种蛋带菌造成雏鸡垂直感染。不同鸡群和鸡场之间可以通过空气、车辆、人员、野鸟、养殖用具等进行水平传播。因此,控制滑液囊支原体的传播首先是减少垂直传播,然后控制人员、车辆、野鸟等的水平传播。
2.5流行特点
滑液囊支原体一年四季均可发病,但夏秋季节易发。据观察鸡的自然感染最早可发生在1周龄,但急性感染通常见于4-16周龄的青年鸡,偶见于成年鸡。在急性期感染期之后出现的慢性感染可持续终生。慢性感染可见于任何日龄。
3、滑液囊支原体的致病机理
3.1掠取宿主细胞营养成分
滑液囊支原体由于自身基因组较为简单,其生物合成能力也相对较弱,因此需要从宿主细胞掠取大量营养物质,造成宿主细胞的营养匮乏和功能受损。如精氨酸缺乏可导致宿主细胞合成畸形染色体。
3.2融合引起的损伤
没有细胞壁的支原体可与宿主细胞互相融合。支原体内的酶类可进入宿主细胞降解宿主细胞内的一些成分引起损伤,同时细胞膜的融合会改变宿主细胞膜的成分和结构使其功能发生改变。
3.3有*代谢产物
支原体在生长繁殖过程中能产生很多有*的代谢产物。如支原体中的膜结合磷酸酶可催化宿主细胞细胞磷脂的水解而干扰宿主细胞的信号级联途径,同时产生的溶血磷脂可影响细胞膜的完整性。
3.4免疫病理损伤
支原体引起的炎性损伤很大程度上是由免疫病理反应引起的。支原体具有抗吞噬作用,能抑制中性粒细胞的活性继发细菌感染。特异性体液免疫的抗体对支原体的清除能力非常有限,同时抗体反应可能引起免疫复合物的产生,从而引起支原体诱导的关节炎和肾小球肾炎。支原体感染还可诱导T细胞产生大量细胞因子,这些细胞因子功能各异,可能有利于支原体的清除也可能会对机体造成损伤。
4、临床症状和病理变化
4.1临床症状
4.1.1潜伏期。
滑液囊支原体的潜伏期会因为感染途径的不同以及菌株*力的差异而不同。自然接触感染鸡群的潜伏期一般在10-20天,经蛋垂直传播的鸡群有可能在一周内发病。
4.1.2临床表现。
鸡感染滑液囊支原体一般出现呼吸道和滑膜、关节症状。死亡率不高。病鸡主要表现慢性、亚临床症状。初期鸡冠苍白、跛行、采食量下降、精神沉郁;随着病情发展,鸡群出现羽毛粗乱、鸡冠萎缩,跖骨伸肌变弱,跗骨间关节内可见*色、粘性至干酪样渗出物。经自然感染的成年蛋鸡,若饲养管理条件佳,无继发感染,其产蛋量和鸡蛋品质一般不会受到影响或影响很小。
滑液囊支原体感染也造成蛋壳尖端缺陷(EAA,图4):蛋壳表面出现黑色、粗糙斑点,光照时钝端出现明显透光性强的分界线。正常蛋壳在扫描电镜下会有乳状突起层、内膜和细胞膜,而滑液囊支原体感染后的鸡胚细胞层变窄,没有乳状突起层,内膜层会变窄(Feberweeetal.,;Jeonetal.,)。
图2MS所致的趾关节囊肿(左),关节腔内多量浑浊渗出物(右)
图3MS引起胸骨囊肿外观(左),剖开可见*色干酪样内容物(右)
图4MS引起的“蛋壳尖端异常症”(eggshellapexabnormalities--EAA)
4.2病理变化
4.2.1大体病变
在传染性滑膜炎的早期,病禽腱鞘的滑液囊膜、关节、龙骨滑膜囊可见有粘稠的、乳酪色至灰白色渗出物(图2、图3),并伴有肝、脾肿大。肾脏大、苍白,呈斑驳状。随着病情的发展,在腱鞘、关节、甚至肌肉和气囊中有干酪样渗出物。在此期间,关节表面,尤其是跗关节和肩关节的表面不同程度地变薄至形成凹陷。在上呼吸道通常无肉眼可见病变。该病的呼吸型病变可能出现气囊炎。
4.2.2组织学病变
在关节,特别是趾关节和跗关节,可见异嗜性白细胞和纤维素浸入关节腔或沿腱鞘浸润。滑液囊膜因绒毛形成和淋巴细胞和巨噬细胞在滑膜下层弥漫性至结节性浸润而增生,此间,软骨表面变色、变薄或形成凹陷,气囊的轻度病变包括水肿、毛细血管扩张和异嗜性白细胞及坏死碎屑在表面聚积,刚严重的病变包括上皮细胞增生、单核细胞弥散性浸润和干酪样坏死。与传染性滑膜炎有关的其他病变还包括:与脾脏鞘动脉有关的巨噬细胞-单核细胞系统增生;心、肝和肌胃的淋巴细胞浸润;以及胸腺和法氏囊萎缩。
5、诊断
根据临床症状和剖检变化很难对滑液囊支原体进行确诊,需要依靠实验室诊断方法快速、准确地诊断该病。常用的实验室诊断方法包括病原分离鉴定、血清学诊断及分子生物学方法。
5.1病原分离鉴定
滑液囊支原体对生长的营养条件极为苛刻和严格。生长必须有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和血清才能生长。急性期的病鸡易于分离到病原,但在感染的慢性阶段则不宜分离到病原。滑液囊支原体的分离培养难度较大,耗时较长,尤其是多种支原体及细菌混合感染时,不适用于快速诊断。
5.2血清学诊断
目前常用的血清学方法有血清平板凝集试验、血凝抑制试验、酶联免疫吸附实验。这些血清学方法的特异性和敏感性存在差异,世界卫生组织(WHO)仅把血清学方法作为群体监测的工具,而不能用来进行个体诊断。因此抗体阳性的样本应该用病原分离鉴定和分子生物学方法进行确诊。
5.3分子生物学方法
相比病原分离鉴定和血清学诊断方法,分子生物学方法大大提高了检测的敏感性和特异性。但滑液囊支原体在体内的数量随着感染时间的延长而减少,PCR未检测到的个体也可能发病。VIhA基因是近几年发现的针对MS序列的基因组靶点,该区域的PCR检测方法已经十分成熟。
5.4鉴别诊断
根据鸡冠苍白、精神沉郁、消瘦、腿软、胸部囊肿、爪垫及跗关节肿大、脾肿大和肝或肾增大等症状可作出初步诊断。必须用细菌学方法排除由细菌引起的滑膜炎或关节炎的可能性。金*色葡萄球菌、大肠杆菌、巴氏杆菌及沙门氏菌也可能是滑膜炎的原发病因。鸡*支原体也可能是引起胸膜囊肿和关节病变的一种原因。
跖骨伸肌或趾深屈肌腱的纤维化及心肌的淋巴细胞浸润与病*性关节炎感染有关,这些症状有助于同滑液囊支原体引起的关节炎相区别。感染病*性关节炎的鸡血清不凝集滑液囊支原体的抗原,但必须牢记,在没有出现明显的关节症状时也可能存在滑液囊支原体的凝集素。
6、预防和治疗
6.1疫苗免疫
中国这几年开始使用滑液囊支原体疫苗,但由于疫苗免疫效果不佳,使用的普及率很低。滑液囊支原体灭活疫苗制作简单,将纯化的菌液加入0.2%的甲醛溶液即可灭活。通过注射灭活苗产生体液免疫,目的是阻断MS的垂直传播。但体液免疫无法对呼吸道产生保护。MS的活疫苗通过对雏鸡经点眼途径免疫,可以在上呼吸道终生定植,持续刺激机体产生免疫保护,大大降低野*的感染风险。目前,只有澳大利亚分离株MS-H作为活疫苗而生产,但其是否具有取代滑液囊支原体现场*株的潜力,目前尚不清楚。
6.2药物治疗
药物治疗能够有效的降低滑液囊支原体的感染,及时减轻发病症状。体外实验表明,滑液囊支原体对泰乐菌素、泰妙菌素、恩诺沙星、诺氟沙星、林可霉素、四环素类等抗菌药敏感,链霉素(宋战胜)有时也有效。但MS对多种药物的耐药性已有报道。临床实验表明,感染初期,可在饲料或饮水中加入敏感抗生素进行治疗;鸡群出现滑膜炎症状后,可加大药物浓度进行治疗。
不同菌株对不同抗生素产生的耐药性是有区别的,因此最好用本场分离的支原体做药敏试验,根据药敏试验结果,选用高敏感药物对发病鸡群进行治疗。用药的时候还应避免长期使用某种抗生素,避免引起分离支原体的抗药性和耐药性,以及药物残留造成的危害。为了克服和减缓耐药性的产生,应采用“轮换用药或穿梭用药”策略,并选用敏感的抗生素,如泰万菌素(tylvalosin)、沃尼妙林等。
沃尼妙林是截短侧耳素类新一代药物,对支原体敏感,但因其与离子型抗球虫药(如盐霉素、莫能菌素等)同时使用易造成鸡只中*、成本高、刺激性大(减少饮水采食)临床使用受到一定限制。泰万菌素是大环内脂类新一代抗生素,对鸡滑液囊支原体等普遍敏感、安全(一般无配伍禁忌)无刺激(不引起饮水采食下降)、使用方便(溶水性好)、休药期短(鸡5天)、成本适中,近年来受到养鸡行业的普遍欢迎。
有报道:采用抗生素,如泰乐菌素和庆大霉素浸蛋或注射的方法对蛋进行处理,或加热处理种蛋等方法可防止种禽群的滑液囊支原体的经蛋传播,但同时会增加死胚率(10-20%)。这种方法仅限于感染几乎可以确定要发生的种群使用。
6.3综合措施
为了取得理想的控制效果,应围绕以下几点开展综合措施:
6.3.1加强饲养管理,保证鸡舍内环境的稳定。呼吸道疾病多由各种病原混合感染加上环境、饲养因素造成。除了药物治疗,还应在改善饲养环境、强化管理等措施上做出努力。尤其应防止温度骤变和空气质量恶化。并保证日粮营养的全面,可适量添加维生素A、C等营养素,以保证机体粘膜的完整,降低感染机会。
6.3.2做好病*性疾病如新城疫、传支、传喉等免疫。
6.3.3控制传播的一般生物安全规则主要有:鸡舍全进全出、统一日龄制;鸡场离其他家禽饲养场至少2公里;设置防野鸟措施;控制人员进出;员工家中禁止饲养家禽;加强鸡群滑液囊支原体流行病学监测;减少鸡群应激反应等。
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