一
流行病学
鸡支原体病在寒冷季节和气候多变季节多发，发病原因也很复杂，而且不容易治疗，易反复发作，易与一些细菌病混感。MG在禽类中可垂直传播，也可水平传播（病鸡呼吸道分泌物或咳出物污染空气、饲料和环境，鸡通过接触污染的空气等而感染）。无论是自然感染还是活菌接种，有了免疫的鸡仍是带菌者，成为横向传播或垂直传播的传染源。MS仅有一种抗原型，但其菌株间*力差异极大，有的易引起呼吸道病变，有的则可能侵害滑膜组织，滑膜病变多因迟发性过敏反应所致。滑膜炎初期还可见溶血性贫血症状，病原体大多经易感鸡的呼吸道入侵，并进入呼吸道黏膜上皮增殖和诱发病症。二
临床诊断
1、临床症状鸡支原体病感染的潜伏期大约在4-20天，发病后主要表现为摇头、流泪、流鼻液、甩鼻等，病情加重时出现呼吸困难、流黏性鼻液、单侧或双侧结膜炎，眼内有豆渣样渗出物，咳嗽喘气，可能伴有气囊炎、鼻窦炎等呼吸道症状。感染滑液囊支原体的病鸡多表现走路不稳、跛行，生长缓慢，脱水，粪便有灰白色尿酸盐沉积，或拉灰绿色、*绿色粪便。脚趾、跗关节和胸脯处有滑液囊炎性病变，通常继发关节囊肿、积液、关节炎症等。2、病理变化MG感染的病死鸡鼻腔及副鼻窦动脉被覆大量粘液及卡他性分泌物，有的伴发肺炎。病鸡气囊浑浊、增厚，其中蓄积卡他性或干酪样炎性渗出物，有些病例仅见有串珠样的淋巴细胞增生灶。病程较长的病例气囊干酪样物呈游离状态，在气囊内贮留不被吸收。偶见关节炎，表现跗关节周围组织水肿，有透明的渗出液，或呈混浊或干酪化。极少数病例伴发卵巢炎及输卵管腔积有少量干酪样渗出物。MS感染的病死鸡急性型可见脾脏肿大，肝、肾肿大，心内膜炎、心包炎，法氏囊与胸腺萎缩，关节滑膜炎及腱鞘炎，滑膜及腱鞘增厚、水肿，其渗出物粘稠呈奶油状，最后成为干酪样物质。慢性型可见关节变形，关节表面粗糙，呈橘*色，关节软骨萎缩，有时趾掌部肿胀并有渗出物。通过临床症状和病理变化可初步诊断，但是鸡MG或MS表面上可能类似于其他病原体引起的呼吸道疫病，如新城疫和鸡传染性支气管炎，这些可与MG或MS混合感染。病原鉴定时，还应考虑到是否存在副鸡嗜血杆菌。在火鸡中，MG感染易与禽肺病*感染相混淆；如出现窦炎，也应怀疑可能有多杀性巴氏杆菌、衣原体或MS感染。MS引起传染性滑膜炎，应与金*色葡萄球菌感染及呼肠孤病*引起的传染性腱鞘炎相区分。确诊需进行实验室检测分析，检定MG和MS既可通过无细胞培养基分离，也可直接检测感染组织或棉拭子的DNA。血清学方法也广泛用于该病诊断。检测结果不明确时，通常对病禽重新采样，尽管也可使用可疑病料接种鸡胚或鸡。三
实验室检测诊断
（一）检测诊断标准（现行）表1禽支原体病检测诊断标准（现行）
（二）检测诊断方法1.病原学检测（1）病菌培养可从活禽的口咽、食管、气管、泄殖腔和生殖突中拭子取样，或死禽的鼻腔、眶下窦、气管或气囊取样，也可吸出眶下窦和关节腔中的渗出物。此外，也可采集未出壳死胎或已破壳但未孵出的死胎样品，从卵*膜内表面、胚胎口咽及气囊中取样。样本拭子接种先后接种于MG液体培养基与固体培养基培养，若MG固体培养基上见中央突起呈荷包蛋样典型菌落，可初步判断为MG，当菌落形态不典型时，需进一步做血清学、分子生物学鉴定。（2）PCR检测将气管拭子、关节囊穿刺液、关节面拭子样品悬浮于1mLPBS溶液中，混匀成悬浮液；气管、肺、气囊等组织器官充分研磨后，加入适量的PBS溶液，制成混悬液备用。将混悬液经过相应程序处理后提取出核酸，设阳性对照和阴性对照，按照下列引物序列进行PCR扩增。表2禽支原体病PCR检测诊断的引物序列结果判定：阳性对照MG的PCR产物为bp，MS的PCR产物为bp，阴性对照无此扩增带时，判定检测有效。若被检样品出现bp扩增带为MG阳性，否则为阴性；若被检样品出现bp扩增带为MS阳性，否则为阴性。2.血清学检测（1）快速血清凝集试验从鸡群采集的血清样品，在干燥洁净的白瓷反应板或载玻片上滴加25μl待检血清，再滴加等量的染色抗原在待检血清上，转动反应板使血清与抗原混合均匀。设立阳性血清和阴性血清对照试验。参考阴阳性血清对照进行判定，当待检血清在2min内发生完全凝集反应的则判为阳性，若仅部分凝集或边缘凝集的判为可疑。（2）免疫胶体金检测方法鸡血清样品的制备，取5μl待检血清于酶标板孔内，用8%生理盐水稀释至μl；或者将血清样品用8%生理盐水稀释20倍后，取μl置于酶标板孔内，备用。取出试剂盒，室温平衡20min，打开包装袋，取出试纸条，将试纸条的样品垫端浸入制备好的样品中，10min内判定结果。结果判定：试样试纸条出现肉眼可见的紫红色质控线，同时也出现肉眼可见的紫红色检测线，结果判定为阳性，反之，如试纸条只出现质控线，而没有出现检测线，则结果判定为阴性，检测线颜色越深说明被检测血清抗体水平越高。（3）血凝抑制试验采集鸡血进行离心制备血清，进行血凝试验和血凝抑制试验。血凝试验：吸取MG抗原进行倍比稀释，最后列为不加抗原的对照组，然后加入0.5%红细胞悬液室温（18-25℃）静置50min结果判定。以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度。血凝抑制试验：设置好阳性对照和阴性对照，对应孔滴加相应的HA抗原，再按要求滴加被检血清、倍比稀释，加入0.5%红细胞悬液，振荡混合后，室温静置约50min后判定结果。将血凝板倾斜，只有那些孔与红细胞对照孔中的RBCs以相同的速率流动的，才被认为是血凝被完全抑制。此时，血清对照孔应显示出清晰的RBCs机状物，而其他对照孔都出现预期的反应。（4）酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种最常见的血清学检测技术，特点是操作简便，诊断速度快，适用于大规模样品的检测。操作方法及判定标准可以根据所采购试剂盒的说明书进行检测分析。参考资料：[1]《NY/T-禽支原体PCR检测方法》
[2]《SN/T-禽支原体病检疫技术规范》
[3]《禽病-禽支原体病（鸡败血支原体与滑液囊支原体）》
[4]禽支原体感染的临床症状与病理变化孙宝华
[5]禽支原体感染流行病学乔卫平
中科基因全国实验室检测分布图
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北京中科基因技术有限公司检测技术分公司
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