沙眼衣原体的实验室检查包括病原学方法和非病原学方法。病原学方法包括衣原体直接镜检、衣原体培养、衣原体抗原检测（免疫层析法、酶联免疫法和直接免疫荧光法）、衣原体核酸检测（包括核酸探针杂交和PCR）；非病原学方法包括衣原体抗体检测（用衣原体抗原检测血中特异的衣原体抗体）、组织病理和尿白细胞计数。本篇内容主要介绍标本直接检查。
1.直接显微镜检查
（1）Giemsa染色或碘染色
Giemsa染色或碘染色临床标本的衣原体直接镜检C.t可在敏感细胞中增殖，在细胞中形成包涵体。用拭子搽落或白金耳刮落含有包涵体的黏膜细胞直接涂片，做Giemsa染色或碘染色，如发现有一定数量的具有特征性的包涵体则可作出诊断。
此法简便易行，但仅适用于新生儿眼结膜炎刮片的检查，对泌尿生殖道沙眼衣原体感染的诊断不够敏感，一般不直接应用于临床标本的检测。
（2）直接免疫荧光试验（DIF）
已有15种血清型的衣原体主要外膜蛋白制成单克隆抗体，并用荧光素做标记。当标本中存在衣原体时，针对沙眼衣原体主要外膜蛋白或脂多糖的单克隆抗体与相应的抗原结合，单克隆抗体标有荧光素，在荧光显微镜下，阳性者可见到亮苹果绿的原体和始体。
此法诊断沙眼衣原体感染的敏感性为70%～90%，特异性为83%～99%。30～40分钟即可出结果。标本的贮存和运送方便，标本中的沙眼衣原体不必是存活的或是有感染性的。由于已经有商品化的试剂盒供应，方便了使用。因而有些实验室将它和衣原体培养并列为扩大的“金标准”。缺点是在低感染率的人群中敏感性差，受实验人员的主观影响大。
它最适宜用来检测沙眼衣原体高流行率人群（如性病门诊患者）。
2.酶联免疫吸附试验先将处理过的固相载体（微孔或珠子）和标本一起孵育，如标本中含有衣原体，即可吸附于固相载体上。把未结合的物质洗去后，再将固相载体与抗衣原体抗体结合，然后再加入含有辣根过氧化物酶的抗体（二抗），二抗能与固相载体上的抗原抗体复合物发生反应。然后再加入底物和邻苯二胺溶液，酶能将其氧化成桔*色，颜色的深浅和抗原的量成正比，颜色可用酶标仪测出，当标本的吸收值大于或等于阈值时则视标本中含有C.t。
此法的一个显著优点是自动化程度高，可同时检测大批量标本，敏感性较高（67%～90%），特异性强（92%～97%），阳性预期值基本可靠（32%～87%）。用仪器判定结果，结果较为客观。
最适宜用来检测沙眼衣原体高流行率人群。在低流行率的人群中应用时，解释结果宜慎重。
3.胶体金免疫沉淀法该法是将附有衣原体单抗的乳胶颗粒（胶体金）复合物吸附于滤纸上，将滤纸夹在两块塑料板中间。如加入的标本中含有衣原体抗原，则标本中的抗原与结合有乳胶（胶体金）的单抗结合。复合物由于毛细作用向前扩散移动，在结果窗中与二抗结合作用出现一条红线，标本即为阳性。
本试验敏感性为87%，特异性为98.8%。试验方法简单，出结果快。但敏感性较差，标本需要有一定量的抗原，抗原含量低时可出现假阴性。
4.分子生物学方法近年来，随着分子生物学的飞速发展，许多分子生物学诊断方法相继出现，核酸杂交（核酸印迹法、斑点印迹法和组织原位杂交法等）特别是核酸扩增试验已不断用于衣原体的诊断。
（1）核酸杂交
核酸杂交是最早用于衣原体诊断的分子生物学方法，其基本原理是具有一定同源性的二条核酸单链在一定条件下（适当的温度和离子浓度等）按碱基互补的原则形成双链。杂交过程高度特异，杂交的双方是探针和待检核酸，待检核酸是衣原体特异的基因或质粒DNA，探针用放射性同位素或非放射性物质标记，以利于信号的检测。根据C.t染色体和质粒的DNA序列设计DNA探针。
目前已有诊断衣原体的商品化探针试剂盒，它是利用标记有荧光素吖啶橙的单链DNA来检测靶衣原体中的rDNA。当形成一定的RNA-DNA复合物后，通过化学发光仪读出结果，敏感性和特异性分别为70%～92%和97%～98%。
（2）核酸扩增
核酸扩增试验是继核酸杂交试验之后又一个重要的检测手段。试验通过对特定对象（靶DNA）的扩增放大，使检测的敏感性大大提高。
目前使用最广泛的是聚合酶链反应（PCR）。测定衣原体DNA，敏感性80%～92%，特异性99%（男性患者尿道标本和生殖道标本无差别，女性尿道标本的敏感性较阴道标本低）。用于诊断沙眼衣原体感染的PCR法已有商品化试剂盒。
PCR法诊断泌尿生殖道沙眼衣原体感染的敏感性高，在细胞培养阴性者亦能检测出沙眼衣原体感染。一种PCR（以质粒DNA顺序为引物）阳性而培养阴性的标本可以用另一种PCR（以不同的质粒DNA顺序或主要外膜蛋白基因顺序为引物）证实，说明可能并非是PCR假阳性结果。然而，也有报告由于“残留”污染而造成PCR假阳性，或因标本中含有Taq酶抑制物质而使PCR呈假阴性。在PCR反应体系中加入内参照可以发现假阴性问题，此时可将标本以反复冻融几次或冻存较长时间或稀释等方法来解决。
临床上，PCR的结果应该结合病史和治疗情况进行分析，必要时重复取材或在另一部位取材作试验。沙眼衣原体核酸扩增技术的另一进展是可用清晨首次尿（或禁尿4小时后的首次尿）作为标本。美国年性传播疾病诊疗指南中，沙眼衣原体的诊断唯一提到的方法就是NAATs，并且提到了清晨首次尿同样可以用于沙眼衣原体感染的诊断。由于尿液取材方便，对患者无侵害，因此这种方法适合于在不同人群中进行大规模筛查，也适合于边远地区标本采集后运送至中心实验室进行检测。
PCR检测技术在衣原体感染中的应用前景是：C.t泌尿生殖道感染的早期诊断，尤其适用于无症状携带者或轻症患者的诊断；做衣原体感染的分子流行病学调查，为性传播疾病的监测提供依据。
本文引自《沙一眼衣原体泌尿生殖道感染刘全忠观点》
编著：刘全忠著
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