聚研是义翘神州区域独家授权代理
支原体检测试剂现货！
大师姐
辛辛苦苦养了1个月的细胞又污染了。
不会吧？大师姐你有3年养细胞的经验，怎么细胞还会污染？我这第一次养细胞，快2个星期了都没污染啊。
小师弟
大师姐
不是我技术差，是你养的细胞太少，时间太短，连个污染的机会都没有~
。。。
小师弟
细胞污染是实验室无法避免的事情，养的细胞多了，时间长了，你总会遇到。没有经历过细胞污染的，肯定没养过多少细胞。一般来说，细菌、念珠菌、霉菌、黑胶虫的污染都可以在显微镜下看到。黑胶虫到底是什么*，现在也无定论哦。
A
B
C
D
图1：光学显微镜下可见污染A细菌污染、B念珠菌污染、C霉菌污染、D黑胶虫污染。
燃鹅，被支原体感染的细胞，肉眼或显微镜下都看不到，病变很不明显，只是和你一起慢慢变老。但通过细胞核染色在荧光显微镜下可看到如下现象。
图2：支原体污染（荧光镜检）A、无污染；B、C有支原体污染。
不幸的是，支原体污染后，可影响细胞DNA、RNA和蛋白的表达。进而影响：细胞生长和繁殖、细胞代谢及功能、染色体异常、免疫细胞的质量。举个栗子：年，CrispinJ.Miller等人（1）在支原体污染的MCF7细胞中通过生物芯片技术，证实了大量基因的表达发生了变化，支原体污染不仅改变了许多细胞因子的表达，还改变了应激反应基因、转运蛋白、受体、离子通道、生长因子、氧化酶、肿瘤抑制基因和癌基因的表达。
图3：Microarray分析支原体污染和未污染的MCF7细胞中mRNA水平的变化情况。A.与未污染的细胞相比较，支原体污染细胞基因表达水平的平均变化（用紫色小圈表示），变化显著大于2倍的基因用橘色小圈表示；B.GO分析归类图2A中的基因的功能。
故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。您可以通过Hoechst等荧光染色法、酶活法、PCR、qPCR等来鉴定细胞是否感染支原体。其中聚研区域独家授权代理的义翘神州有qPCR方法的支原体核酸定量检测试剂盒，可以在数小时内鉴定76种支原体。所有型号的荧光定量qPCR仪器通用，而且是现货哦！
一、原理：16SrRNA基因是细菌上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的基因组中。16SrRNA具有高度的保守性和特异性。本试剂盒在16S-rRNA上设计引物和探针，在为客户提供支原体检测的同时也提供了虫原体、中间原体和螺原体的检测。节约客户成本的同时提供更多的服务。
二、组份：支原体qPCR检测试剂盒中包含qPCR反应所需要各种试剂组分，如：引物、探针、dNTPs、缓冲液、热启动Taq酶、稳定剂等。在支原体检测时只需要加入待检测样品，即可进行qPCR扩增反应，根据产物Tm值判断待检测样品中是否有支原体的污染。
三、操作方法
A样品准备：
1---快速取样法
1.1取2-5μL样品，加入95μL超纯水稀释20倍，稀释后的样品取2-6μL直接做模板进行qPCR检测。
1.2取50μL培养基转移至1.5mL离心管，95℃温浴5-10min，加入μL超纯水将煮沸后的培养基稀释20倍，20,×g离心1min使变性的蛋白沉淀，取2-6μL上清直接做模板进行qPCR检测。
1.3大批量检测培养基中支原体可采用此步骤。
2---浓缩支原体DNA
2.1培养基中支原体DNA富集处理：取1mL培养基转移至1.5mL离心管，20,×g离心5min后小心移去上清，用1mLPBS重悬沉淀，20,×g离心5min后小心移去上清，再用1mLPBS重复上述步骤，最后用μL超纯水重悬沉淀，95℃温浴5-10min，20,×g离心1min使变性的蛋白沉淀，取0.1-10μL上清直接做模板进行qPCR检测。
2.2小批量检测培养基中的支原体可采用此步骤。
2.3细胞中支原体DNA富集简单处理
收集1*E6-5*E6个细胞的细胞液，10,×g离心1min使细胞沉淀，小心移去上清。用1mLPBS重悬细胞，10,×g离心1min后小心移去上清，再用1mLPBS重复上述步骤，最后用μL超纯水重悬沉淀，95℃温浴5-10min，20,×g离心1min使变性的蛋白沉淀，取0.1-10μL上清直接做模板进行qPCR检测。
2.4大批量检测细胞中支原体可采用此步骤。
2.5采用基因组提取试剂盒提取细胞中的基因组。
2.6小批量检测细胞中的支原体可采用此步骤。
B反应体系配置
C反应条件
D盖上反应管盖，瞬时离心，确保所有组分均在管底。
E将反应体系置于PCR仪中，开始反应。四、试剂盒质量控制
试剂盒的各个对照品需要达到一下要求，否则实验视为无效。
五、结果判定
参考文献：
(1)CrispinJ.Miller,HebaS.Kassem,etal..Mycoplasmainfectionsignificantlyaltersmicroarraygeneexpressionprofiles.BioTechniques.35:-.
防治支原体感染
支原体直径小（约0.1-0.6μm）可以轻松地通过滤膜，其缺乏细胞壁，所以常规的抗生素并不能起作用。BM-Cyclin含有泰妙菌素(BM-Cyclin1)和二甲胺四环素(BM-Cyclin2)两种有效成分,能够有效抑制支原体生长,其中泰妙菌素与支原体核糖体的肽基转移酶中心结合,导致多肽链起始复合物不能正确地装配,从而导致支原体无法合成自身蛋白质;而二甲胺四环素抑菌原理是与原核生物核糖体30S亚基的A位置结合,阻止肽链的延长。聚研独家代理的ROCHE的BM-Cyclin，品质保证，广州现货1日达！
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